因此，確定層析填料的使用壽命是一個非常重要的問題，各國監(jiān)管部門也出于對藥品安全性和有效性的考量，在其法規(guī)文件有明確規(guī)定：《中國藥典》三部的“人用重組單克隆抗體制品總論”中提到需要驗證純化用材料（如色譜柱填料）的重復(fù)使用性的可接受性限度^[3]；FDA在1997年的“人用單克隆抗體產(chǎn)品的生產(chǎn)和分析考慮要點”中要求必須要有預(yù)先設(shè)定的使用限值^[4]。

PDA TR14^[5]，柱層析工藝的驗證中總結(jié)了層析填料所需要的研究/驗證及規(guī)模要求。有些驗證需要在商業(yè)化生產(chǎn)規(guī)模上進(jìn)行，而有些則只能在縮小模型上進(jìn)行（見表1）。

表1 不同規(guī)模的驗證研究

關(guān)于層析填料壽命驗證，大部分企業(yè)會在產(chǎn)品正式進(jìn)入商業(yè)化生產(chǎn)之前，使用縮小模型開展填料的壽命研究，通過對柱效、載量、純度、雜質(zhì)含量、收率等評判維度進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，以確定填料的循環(huán)使用壽命。

縮小模型采用線性縮小的原則，維持層析純化的柱床高度、線性流速、上樣載量、緩沖液/柱體積比值（CV數(shù)）以及洗脫收集標(biāo)準(zhǔn)不變，縮小層析柱的柱直徑、體積流速和樣品體積，同時關(guān)注層析柱壓力、樣品擴(kuò)散、系統(tǒng)死體積和柱效等因素。

良好的填料維護(hù)對層析填料的壽命至關(guān)重要，層析填料的維護(hù)主要包括再生、清潔和保存，需要同步開展驗證。

影響層析填料壽命的最重要因素是層析填料的再生和清潔。PDA TR14[5]指出：在進(jìn)行驗證研究設(shè)計時就應(yīng)考慮填料的再生方法，以便建立填料重復(fù)使用限度。在工藝研發(fā)階段，就應(yīng)研發(fā)有效的填料清潔程序以允許介質(zhì)在多次生產(chǎn)批的重復(fù)使用并且提供充分的清潔。填料清潔程序的有效性將通過縮小規(guī)模前瞻性研究建立，然后在生產(chǎn)規(guī)模條件下，通過一個驗證方案或者通過連續(xù)的監(jiān)測進(jìn)行確認(rèn)。填料的清潔程序應(yīng)有效，以阻止殘留物的積累。這將最小化對后續(xù)批的殘留，保持填料的性能。

層析填料的清潔驗證可使用淋洗水方法或空白運行方法。檢測的項目則包括TOC、總蛋白以及一些特定工藝相關(guān)雜質(zhì)，比如宿主細(xì)胞蛋白和宿主細(xì)胞核酸等?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)的話，一般采用行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，不過企業(yè)也可以自行設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)，尤其是對于特定的工藝相關(guān)雜質(zhì)。

PDA TR60-3^[6]生物制藥原液的工藝驗證技術(shù)報告指出：應(yīng)證明在預(yù)期壽命內(nèi)保持層析填料性能特征所需要的保存時間和條件。盡管層析填料廠家可以提供填料的貨架期、保存液的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)，但是仍然需要進(jìn)行一定的層析填料保存驗證工作。主要是因為供應(yīng)商提供的層析填料保存數(shù)據(jù)是使用新鮮填料，并且在散裝保存條件下進(jìn)行。大多數(shù)生物制藥的實際生產(chǎn)中，保存的層析填料往往是使用過的，而且很多時候是柱上保存，因此層析填料的保存驗證應(yīng)當(dāng)考慮到這些實際條件，主要檢測項目包括微生物、內(nèi)毒素、功能等。

利用含有單克隆抗體的細(xì)胞培養(yǎng)上清，對MaXtar ARPA 親和層析介質(zhì)進(jìn)行了100個循環(huán)以上的測試，每個循環(huán)進(jìn)行0.5 M NaOH 15 分鐘的在位清洗，測試數(shù)據(jù)表明MaXtar ARPA親和層析介質(zhì)配基脫落水平較低，同時具有較高水平的動態(tài)結(jié)合載量（＞70 mg/mL），在進(jìn)行100個循環(huán)試驗后依然可以達(dá)到80%初始水平。在146個試驗循環(huán)內(nèi)，始終保持優(yōu)秀的HCP去除能力，同時樣品的SEC-HPLC表現(xiàn)出高純度和高穩(wěn)定性。