圖1：干細(xì)胞分化潛能分類

• 原代分離：分離時(shí)一般使用膠原酶分解供體的組織，使用專用培養(yǎng)基在平皿內(nèi)貼壁培養(yǎng)，此時(shí)為P0代。

• 建立種子庫：在得到原代細(xì)胞后，使用細(xì)胞瓶或者細(xì)胞工廠擴(kuò)大培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞的生長數(shù)量情況得到大量的P2-3代細(xì)胞，用來建立工作種子庫，此時(shí)需要進(jìn)行一系列的質(zhì)量檢測(cè)，包括表面標(biāo)志物，三系分化能力等。

• 規(guī)模生產(chǎn)：在規(guī)?；a(chǎn)時(shí)，異體現(xiàn)貨型制劑，可采用反應(yīng)器等方式進(jìn)行生產(chǎn)，以滿足對(duì)細(xì)胞數(shù)量的要求。

• 細(xì)胞收獲：生產(chǎn)好的制劑來不及輸注時(shí)，可考慮凍存的方式暫存，但需要考慮冷凍的方式。

圖2：間充質(zhì)干細(xì)胞生產(chǎn)流程

由于MSC的特性，必須采用貼壁培養(yǎng)的方式，因此微載體結(jié)合攪拌式反應(yīng)器是常用的培養(yǎng)方式。市面上的微載體主要由明膠、葡聚糖、聚苯乙烯和海藻酸鹽等原材料生產(chǎn)，并在結(jié)構(gòu)上主要分為無孔、微孔以及大孔等。

據(jù)報(bào)道，目前已有多款微載體可成功培養(yǎng)MSC，理想的微載體是不含有動(dòng)物源成分且能提供較大的表面積，同時(shí)細(xì)胞分離也比較方便，避免酶在消化時(shí)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生影響。

培養(yǎng)基的選擇

由于監(jiān)管以及安全性等各方面的考慮，未來細(xì)胞類藥物的生產(chǎn)需要逐漸減少對(duì)血清的依賴，使用添加細(xì)胞因子的無血清的培養(yǎng)基會(huì)是未來的趨勢(shì)。

生物反應(yīng)器的選擇

在使用攪拌式反應(yīng)器進(jìn)行細(xì)胞規(guī)模擴(kuò)增時(shí)，如果使用20L反應(yīng)器，在20天內(nèi)至少可以生產(chǎn)數(shù)百個(gè)細(xì)胞制劑，此時(shí)的細(xì)胞代數(shù)可以保持在P5-6代，還可以保持比較好的治療效果。若對(duì)于細(xì)胞數(shù)量有更高的要求，可以選擇更大體積（如50L及以上）的反應(yīng)器進(jìn)行生產(chǎn)。

傳統(tǒng)的反應(yīng)器在GMP生產(chǎn)時(shí)，由于清洗、滅菌和驗(yàn)證等方面在監(jiān)管時(shí)可能會(huì)有較大挑戰(zhàn)，因此建議采用一次性工藝。如一次性反應(yīng)器，具有快速布局，減少對(duì)車間改造的成本優(yōu)勢(shì)。同時(shí)也避免了反應(yīng)器設(shè)備的清洗和消毒驗(yàn)證步驟，減少交叉污染，縮短藥物生產(chǎn)和上市周期。

百林科自主研發(fā)的CytoLinX^? BR一次性罐體式生物反應(yīng)器涵蓋10-2000 L不同培養(yǎng)體積。自產(chǎn)品推出以來，已在行業(yè)中累計(jì)了多種細(xì)胞成功培養(yǎng)的案例數(shù)據(jù)。該反應(yīng)器同樣也適用于MSC藥物的工藝開發(fā)到規(guī)模化生產(chǎn)，可輕松實(shí)現(xiàn)從小規(guī)模培養(yǎng)到生產(chǎn)級(jí)別的放大。

結(jié)語

隨著細(xì)胞治療逐步進(jìn)入規(guī)范化、產(chǎn)業(yè)化階段，穩(wěn)定、高效的生產(chǎn)體系將成為推動(dòng)MSC藥物走向臨床與市場的核心驅(qū)動(dòng)力。

百林科將持續(xù)以創(chuàng)新的一次性反應(yīng)器技術(shù)為核心，助力客戶在干細(xì)胞藥物開發(fā)與生產(chǎn)中實(shí)現(xiàn)更高的效率與更優(yōu)的質(zhì)量控制。未來，我們將繼續(xù)攜手行業(yè)伙伴，共同推動(dòng)MSC及更多細(xì)胞治療產(chǎn)品的工藝革新與臨床轉(zhuǎn)化，加速生命科學(xué)的每一次突破。