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純化小技巧：MaXtar® SP HR——“高分辨率”絕非空談

MaXtar^? SP HR 廣泛應(yīng)用于抗體（包括單抗、雙抗）及重組蛋白的純化工藝中。

隨著行業(yè)不斷發(fā)展，復(fù)合模式填料的種類日益豐富，為許多項目提供了更多選擇。但高分辨率陽離子填料憑借分辨率高、易于工業(yè)放大、成本相對較低等優(yōu)勢，在大分子生物制藥領(lǐng)域仍維持較高的市場需求?；诖?，本文將全面介紹百林科的高分辨率陽離子產(chǎn)品——MaXtar^? SP HR。

優(yōu)異的分離能力

MaXtar^? SP HR 優(yōu)異的分離性能主要源于其粒徑分布。該產(chǎn)品平均粒徑為 40 μm，整體粒徑較小，導(dǎo)致理論塔板數(shù)（N）較高，因此具有較高的分離度。而MaXtar^? SP HR的離子交換作用模式則源于其配基（磺丙基）的性質(zhì)，從而根據(jù)電荷差異分離雜質(zhì)與目的蛋白，以及電荷異構(gòu)體。

應(yīng)用案例一

樣品信息：雙特異性抗體（pI 8.6）
柱體積：4.7 mL(H=10 cm)
平衡緩沖液：10 mM HAc, 10 mM PB, 10 mM檸檬酸，pH5.0
洗脫緩沖液：10 mM HAc, 10 mM PB, 10 mM檸檬酸,1M NaCl， pH7.5 (0-100%B，10CV)
載量：20 mg/mL

圖片1.png

圖1：雙抗純化層析圖譜

表1.jpg

表1：雙抗純化前后SEC純度表現(xiàn)

小結(jié)：

MaXtar^? SP HR在此雙抗的純化中具有優(yōu)異的分離效果，其中低分子雜質(zhì)去除能力尤為顯著，低分子雜質(zhì)由7.14%下降至0.27%，最終SEC純度達到99.7%。

應(yīng)用案例二

樣品信息：帶狀皰疹疫苗（VZV）
柱體積：53 mL(D=26 mm, H=10 cm)
平衡緩沖液：20 mM PB，pH5.8
洗脫緩沖液：20 mM PB，1 M NaCl，pH5.8 (50%B，5CV)
保留時間：10 min

圖片2.png

圖2：帶狀皰疹純化層析圖譜

表2.jpg

表2：MaXtar^? SP HR純化前后殘留含量

小結(jié)：MaXtar^? SP HR在疫苗項目中以流穿模式進行純化，可有效降低HCP與HCD的殘留。

優(yōu)異的性能表現(xiàn)

1、優(yōu)異的批間表現(xiàn)

圖片3.png

圖3：MaXtar^? SP HR 2批次結(jié)合力表現(xiàn)

小結(jié)：

使用溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)蛋白對MaXtar^? SP HR結(jié)合力進行表征，不同批次結(jié)合能力無明顯差異。

2、工業(yè)化放大表現(xiàn)

（1）壓力流速曲線

圖片10.png

圖4：MaXtar? SP HR壓力流速曲線

（2）生產(chǎn)裝柱

表3&圖.jpg

表3 & 圖5：MaXtar^? SP HR填料

工業(yè)放大應(yīng)用案例

小結(jié)：

MaXtar^? SP HR基于MaXtar^? 高流速改良瓊脂糖基架，壓力達到3 bar時，線性流速≥270 cm/h，已成功應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。

3、壽命驗證表現(xiàn)

實驗信息：

柱體積：5.3 mL(D=6.6mm H=15.5 cm)
載量：53 mg/mL填料
循環(huán)次數(shù)：160
消毒方式：1 M NaOH

圖片5.png

圖6：MaXtar^? SP HR壽命驗證層析圖譜疊圖

圖片9.png

圖7：（a）壽命實驗過程中的SEC純度表現(xiàn)；

（b）壽命實驗過程中酸堿峰變化表現(xiàn)。

小結(jié)：

MaXtar? SP HR 壽命驗證160次循環(huán)后層析圖譜無明顯差異，SEC純度與酸堿峰分布基本保持不變。

純化策略總結(jié)

當(dāng)MaXtar^? SP HR 主要應(yīng)用于重組蛋白與抗體純化時，其作用模式為離子交換，分離機制基于目的蛋白與雜質(zhì)之間的電荷差異。因此，通常通過調(diào)節(jié)鹽濃度（如NaCl）或pH值來實現(xiàn)電荷性質(zhì)不同的組分之間的分離。

工藝開發(fā)初期，建議優(yōu)先采用NaCl線性洗脫，初步掌握雜質(zhì)與目的蛋白的洗脫電導(dǎo)范圍，后續(xù)可進一步優(yōu)化為歩級洗脫。
若僅通過鹽梯度無法實現(xiàn)有效分離，可進一步嘗試pH線性優(yōu)化，或采用pH與NaCl相結(jié)合的雙梯度優(yōu)化策略。
需注意載量對分辨率的影響：載量越高，分辨率越低；而載量過低則會影響目的蛋白的回收率以及工業(yè)放大后的經(jīng)濟效益。因此，在保證分辨率的同時，也需確定合適的載量范圍。

產(chǎn)品貨號