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純化小技巧 | 標(biāo)簽蛋白親和填料選擇

重組蛋白領(lǐng)域，利用標(biāo)簽進(jìn)行純化，已經(jīng)是一種成熟、高效的純化方法。

設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)表達(dá)質(zhì)粒時(shí)，可在其N端或C端引入親和標(biāo)簽方便后續(xù)純化，由于標(biāo)簽蛋白與金屬離子等具有特異性的吸附作用，因此選用親和層析來進(jìn)行純化時(shí)需要先對(duì)目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)以及親和力位點(diǎn)進(jìn)行充分評(píng)估。

部分常見標(biāo)簽蛋白特點(diǎn)如下表

標(biāo)簽蛋白親和層析填料的選擇

His標(biāo)簽重組蛋白會(huì)在載體構(gòu)建階段引入組氨酸標(biāo)簽，因此可以選用含鎳離子的親和填料進(jìn)行捕獲，含有GST標(biāo)簽的重組蛋白可選用谷胱甘肽親和層析法。百林科填料選擇見下圖：

典型產(chǎn)品應(yīng)用進(jìn)展、競(jìng)品策略分享 2024.08.30 - 副本_01(1).png

Ni²⁺不同螯合方式的介紹

氨酸 (His) 側(cè)鏈上的咪唑基團(tuán)能夠與多種金屬離子（如Ni²⁺、Co²⁺、Cu²⁺、Zn²⁺等）形成配位鍵并選擇性結(jié)合，其中，Ni²⁺是純化His標(biāo)簽蛋白的首選金屬離子，也是目前使用最為廣泛的金屬離子。

通常大家所接觸的IDA、NTA和TED的不同螯合形式，就是基于Ni²⁺的不同螯合策略實(shí)現(xiàn)。Ni²⁺為六價(jià)，IDA偶聯(lián)需要占用其三個(gè)位點(diǎn)，還剩余三個(gè)位點(diǎn)結(jié)合His標(biāo)簽；第二種偶聯(lián)方式NTA則是占據(jù)Ni²⁺的四個(gè)位點(diǎn)，剩余兩個(gè)位點(diǎn)結(jié)合His標(biāo)簽；而第三種方式TED偶聯(lián)則需要占據(jù)五個(gè)位點(diǎn)，剩余1個(gè)位點(diǎn)結(jié)合His標(biāo)簽。

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