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純化小技巧 | 凝膠過濾層析介質(zhì)在病毒疫苗的應(yīng)用


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作為一種非細胞型生物,病毒通常寄生于活細胞內(nèi),利用宿主的代謝系統(tǒng)以復(fù)制的方式進行增殖。

病毒(Biological virus)是一種非細胞的生命形態(tài),個體小、結(jié)構(gòu)簡單,通常只含有一種核酸,即 DNA 或 RNA。


雖然大家談“病毒”色變,但隨著科學(xué)研究的發(fā)展,運用科學(xué)的手段,引入部分或全部的病毒成分,或者使用經(jīng)過處理的病毒,可以激發(fā)人體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生特定的抗體和免疫細胞,病毒疫苗的概念由此誕生。


病毒疫苗的開發(fā)歷經(jīng)了嚴格的科學(xué)探究和臨床試驗,以確保其具有安全性和有效性。常見的病毒疫苗有流感疫苗、狂犬疫苗、水痘疫苗、肝炎疫苗、肺炎疫苗等。


病毒疫苗的純化過程


在病毒的研究中,提純是其必不可少的重要一環(huán),高純度的病毒樣品使對病毒的研究更詳盡;同理,先進的分離純化技術(shù)會對病毒疫苗的制備起到關(guān)鍵性作用。


提到疫苗的純化方法,首先映入腦海的可能是親和層析、離子交換層析、疏水層析,其中,最容易被人忽視的,可能就是凝膠過濾層析。本期,我們主要對病毒疫苗純化過程中的凝膠過濾層析介質(zhì)進行介紹。


凝膠過濾層析(Gel Filtration Chromatography,GFC),又被稱為尺寸排阻層析(Size Exclusion Chromatography,SEC),其分離原理主要是利用球狀凝膠內(nèi)的篩孔的大小,分離不同分子量大小樣品的一種方法。

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凝膠過濾層析示意圖


Chromstar? 4FF 作為凝膠過濾層析介質(zhì)的典型代表,通常應(yīng)用在重組蛋白、抗體、核酸、病毒及類病毒顆粒、多糖等領(lǐng)域,尤其是在流感疫苗中有著突出的表現(xiàn):一方面可以去除雞胚流感疫苗中的卵清蛋白;另一方面在細胞流感疫苗中,在 HA 的產(chǎn)率和蛋白的去除率上都有很好的效果。


技術(shù)參數(shù)

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* 當(dāng)柱床高度≥ 60 cm 時,推薦將流速降至 45~60 cm/h。

** 層析介質(zhì)在 40 ℃,pH 2-14 環(huán)境下放置7天后,其理化性質(zhì)和功能沒有明顯變化。


應(yīng)用案例

Chromstar? 4FF純化流感病毒疫苗


填料:Chromstar? 4FF


層析柱:Chrom-LinX? 16/700 (H=60 cm)


樣品:流感病毒


樣品體積:10 mL


流速:6 mL/min


緩沖液:10 mM PBS


3.png


小結(jié):Chromstar? 4FF 三次純化該流感疫苗,HA 回收率均能達90%以上,蛋白去除率可達47%。


產(chǎn)品貨號

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訂貨信息

歡迎聯(lián)系當(dāng)?shù)劁N售和技術(shù)人員或撥打熱線:400-058-9000。


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