瞬時(shí)轉(zhuǎn)染是將DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞的技術(shù)，其特點(diǎn)是載體基因不整合到細(xì)胞基因組上，而是隨著細(xì)胞分裂而逐漸丟失。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染可在短時(shí)間內(nèi)獲取目的基因的表達(dá)產(chǎn)物，目前常用的瞬轉(zhuǎn)方法有化學(xué)試劑轉(zhuǎn)染，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染，病毒載體轉(zhuǎn)染和電轉(zhuǎn)等。

PEI(聚乙烯亞胺)為化轉(zhuǎn)試劑之一，其原理是帶正電的PEI能將帶負(fù)電的DNA包裹成為帶正電的PEI-DNA復(fù)合物，PEI-DNA復(fù)合物可結(jié)合細(xì)胞表面通過(guò)胞吞作用進(jìn)入細(xì)胞，PEI相比于其他轉(zhuǎn)染試劑有著成本低廉的優(yōu)勢(shì)，因此被廣泛應(yīng)用。

細(xì)胞在導(dǎo)入表達(dá)載體后不經(jīng)選擇培養(yǎng)，載體DNA隨細(xì)胞分裂而逐漸丟失，目的蛋白的表達(dá)時(shí)間較短，相對(duì)于穩(wěn)定表達(dá)系統(tǒng)，瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)無(wú)需將外源基因整合到基因組上，避免了外源基因整合過(guò)程中位置效應(yīng)的影響。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染一般用于基因產(chǎn)物的短期表達(dá)，進(jìn)行蛋白質(zhì)小規(guī)模合成。

那么如何能快速地搭建瞬轉(zhuǎn)平臺(tái)呢？

主要分五步：載體構(gòu)建→質(zhì)粒抽提→細(xì)胞準(zhǔn)備→瞬時(shí)轉(zhuǎn)染及細(xì)胞培養(yǎng)→純化及質(zhì)量檢測(cè)

對(duì)于少量的質(zhì)粒抽提，可以選用控內(nèi)毒的質(zhì)粒抽提試劑盒，現(xiàn)在一些國(guó)產(chǎn)的試劑盒完全可以滿足實(shí)驗(yàn)的需要。對(duì)于大量的質(zhì)粒抽提，可以使用層析的方式，百林科擁有完善的質(zhì)粒純化平臺(tái)，可以針對(duì)不同的實(shí)驗(yàn)要求，提供差異化的質(zhì)粒純化解決方案。

抽提的質(zhì)粒通過(guò)跑分子膠鑒定大小及純度，OD260/OD280 以及 OD260/OD230 確定質(zhì)粒的質(zhì)量。百林科質(zhì)粒純化平臺(tái)三步法：分子篩(Chromstar^? 6FF)+親和(MaXtar^? Plasmidcap HR)+陰離子(MaXtar^? Q HR) 能協(xié)助客戶解決大規(guī)模質(zhì)粒純化制備的問(wèn)題。

目前常用的瞬轉(zhuǎn)表達(dá)宿主為 CHO 細(xì)胞和 HEK293 細(xì)胞，均有耐受較高剪切力和滲透壓，表達(dá)水平較高，支持懸浮培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)。HEK293 細(xì)胞相對(duì)于 CHO 細(xì)胞在轉(zhuǎn)染效率方面更有優(yōu)勢(shì)，由于 HEK293 為人源細(xì)胞，適用于表達(dá)翻譯后修飾要求更高的重組蛋白。

CHO 細(xì)胞為鼠源細(xì)胞，比 HEK293 細(xì)胞生長(zhǎng)更快，外源蛋白分泌更少，分離純化更簡(jiǎn)便，且 CHO 細(xì)胞在放大生產(chǎn)方面相比于 HEK293 細(xì)胞更為穩(wěn)定，因此大多數(shù)研究者選擇用 CHO 細(xì)胞作為抗體類藥物的瞬轉(zhuǎn)表達(dá)宿主。

瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的方法有很多，現(xiàn)在最常用的方法為 PEI 轉(zhuǎn)染。選用轉(zhuǎn)染效率高的 PEI 很關(guān)鍵。使用 DOE 的方法確定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的密度，質(zhì)粒和 PEI 的用量，確定質(zhì)粒和 PEI 孵育的時(shí)間。

轉(zhuǎn)染完成后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，添加 Enhancer 和補(bǔ)料，培養(yǎng)周期根據(jù)蛋白的累計(jì)效果及穩(wěn)定性來(lái)確定。培養(yǎng)結(jié)束后用 SEC-HPLC，Biacore 或者 Elisa 的方法檢測(cè)表達(dá)量。

帶標(biāo)簽的蛋白可以通過(guò)親和填料純化得到目標(biāo)蛋白，不帶標(biāo)簽的可以通過(guò)離子交換，復(fù)合模式，或者疏水填料分離得到目標(biāo)蛋白。得到目標(biāo)蛋白后進(jìn)行質(zhì)量分析，通過(guò) SDS-PAGE 和 SEC-HPLC 初步分析蛋白的質(zhì)量。