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純化小技巧 | 抗體分離中的陽離子交換層析介質(zhì)


在抗體純化的經(jīng)典三步法,親和捕獲+陽離子交換+陰離子交換中,早期已介紹過百林科陰離子交換層析介質(zhì)詳見 純化小妙招| 抗體分離中的陰離子交換層析介質(zhì)


今天,重點(diǎn)介紹一下百林科陽離子交換層析介質(zhì)



百林科陽離子交換層析介質(zhì)豐富多樣,依據(jù)基架類型,分為MaXtar? 基架和Chromstar? 基架,兩者主要區(qū)別在于耐壓,MaXtar? 基架通??梢阅褪?.5MPa壓力,Chromstar基架可以耐受0.3MPa壓力;根據(jù)配基的類型,可以分為SP(強(qiáng)陽)、S(強(qiáng)陽)、CM(弱陽)幾種類型。



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百林科MaXtar? 基架的

幾種陽離子交換層析介質(zhì)介紹


* 動態(tài)載量的測量條件:4.7 ml 預(yù)裝柱,裝柱高度:10 cm,在保留時(shí)間為5分鐘時(shí)測量10% 穿透時(shí)的動態(tài)結(jié)合能力。測試緩沖液:50 mM 醋酸鈉,pH 5.5(單克隆抗體)。

** 動態(tài)載量測量條件:裝柱高度:10 cm,測試流速600 cm/h ,測試緩沖液:0.1 M 檸檬酸鹽溶液,pH 3.0,測試樣品:4 mg/ml 的 β- 乳球蛋白樣品,當(dāng) β-乳球蛋白的穿透量達(dá)到10% 時(shí),單位介質(zhì)體積(ml) 的 β- 乳球蛋白上樣量(mg)。

*** 動態(tài)載量測量條件:裝柱高度:10 cm,測試流速150 cm/h ,測試緩沖液:0.2 M 磷酸鈉溶液,pH 7.2,測試樣品:4 mg/ml 溶菌酶樣品,當(dāng)溶菌酶的穿透量達(dá)到10% 時(shí),單位介質(zhì)體積(ml) 的溶菌酶上樣量(mg)。


MaXtar? S HC作為百林科的明星產(chǎn)品,是一款高載量高分辨率的強(qiáng)陽離子交換層析介質(zhì),利用不同分子在特定條件下電荷性質(zhì)和多少的差異對其進(jìn)行分離。



 在抗體的應(yīng)用上有突出的高載量

采用CHO細(xì)胞表達(dá)的單克隆抗體(精純后蛋白)作為樣品,對MaXtar? S HC和MaXtar? SP HR的DBC(動態(tài)結(jié)合載量)進(jìn)行探索,發(fā)現(xiàn):MaXtar? S HC的DBC明顯優(yōu)于MaXtar? SP HR,是其的2倍。實(shí)驗(yàn)條件如下:

層析柱:4.7 ml預(yù)裝柱,裝柱高度10 cm,柱體積約4.7 ml

樣品:CHO細(xì)胞表達(dá)的單克隆抗體(精純后蛋白)

平衡緩沖液:50mM醋酸鈉,pH5.5

洗脫緩沖液:50mM醋酸鈉,1M氯化鈉,pH5.5

保留時(shí)間:5 min



表1.png

表1. MaXtar? S HC和MaXtar? SP HR

在QB10的動態(tài)結(jié)合力


在抗體的應(yīng)用上有突出的高回收率


依據(jù)單抗料液實(shí)際載量的80%進(jìn)行上樣洗脫測試,發(fā)現(xiàn):MaXtar? S HC純化后樣品純度達(dá)99.4%,收率為92.6%,HCP去除效果顯著。實(shí)驗(yàn)條件如下:




層析柱:4.7 ml預(yù)裝柱,裝柱高度10 cm,柱體積約4.7 ml

樣品:陰離子交換層析介質(zhì)純化后的單抗料液

平衡緩沖液:50mM醋酸鈉,pH5.12

洗脫緩沖液:50mM醋酸鈉,1M氯化鈉,pH5.11,0~100%B 20CV

保留時(shí)間:5 min


圖片1.png


圖2. MaXtar? S HC的結(jié)合洗脫圖譜

標(biāo)222.png

表2. MaXtar? S HC的純化結(jié)果


MaXtar? S HC除去在抗體純化上有優(yōu)異得表現(xiàn)外,同樣也適用于抗體偶聯(lián)藥物(Antibody-Drug Conjugate,ADC)的精純,詳見【純化小技巧 | 百林科助力ADC下游純化的層析介質(zhì)】。


百林科也希望在抗體、ADC及更多領(lǐng)域?yàn)榭蛻籼峁┩晟频姆?wù)支持,助力各領(lǐng)域“通達(dá)無限可能”。



產(chǎn)品貨號



新表3.png


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