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純化小技巧 | 帶狀皰疹疫苗常用填料分享

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帶狀皰疹是由水痘——帶狀皰疹病毒（varicella-zoster virus，VZV），引起的一種感染性疾病。

對(duì)于該感染性疾病，醫(yī)學(xué)上尚無特效藥，對(duì)其進(jìn)行預(yù)防接種疫苗則成為目前最有效、最經(jīng)濟(jì)的手段。當(dāng)今帶狀皰疹疫苗的研發(fā)工藝路徑主要分為三種類型：減毒活疫苗、基因工程重組疫苗及mRNA疫苗。目前，全球銷售規(guī)模最大的疫苗則主要以重組帶狀皰疹疫苗為主。

重組帶狀皰疹疫苗層析純化工藝路線

陰離子捕獲——MaXtar^? Q

在捕獲階段選擇陰離子交換層析介質(zhì)，可以去除一大部分HCP和雜質(zhì)蛋白，最大程度獲取目的物。百林科MaXtar^? Q強(qiáng)陰離子交換層析介質(zhì)，其基架具有更強(qiáng)剛性，在較低的反壓下能夠?qū)崿F(xiàn)更高工藝流速，提高工藝效率；配基偶聯(lián)方式的升級(jí)，可以有效提高層析介質(zhì)的動(dòng)態(tài)結(jié)合載量。

MaXtar^? Q能有效捕獲目的蛋白

MaXtar^? Q純化重組帶狀皰疹疫苗發(fā)酵液上清，能有效捕獲高純度目的蛋白。

層析柱：Chrom-LinX? 26/400，柱高20 cm

樣品：重組帶狀皰疹疫苗發(fā)酵液上清

Buffer A：20mM PB，pH6.8

Buffer B：20mM PB，1M NaCl，pH6.8

流速：120 cm/h

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圖1 MaXtar? Q純化帶狀皰疹疫苗層析圖譜

針對(duì)MaXtar^? Q純化層析介質(zhì)，百林科也對(duì)其在耐酸堿鹽條件下的使用壽命做了一定研究。通過模擬CIP條件（1M HAc+1M NaCl，1M NaOH），進(jìn)行150個(gè)循環(huán)后，我們發(fā)現(xiàn)，MaXtar^? Q的動(dòng)態(tài)結(jié)合載量沒有明顯差異。

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圖2 不同循環(huán)測(cè)試MaXtar^? Q的動(dòng)態(tài)結(jié)合載量表現(xiàn)

疏水中度純化——Phenyl Chromstar^? HP

中度純化階段選擇疏水相互作用層析介質(zhì)，去除樣品中的主要雜質(zhì)，并進(jìn)一步去除HCP。百林科的Phenyl Chromstar^? HP采用細(xì)粒徑設(shè)計(jì)，分辨率提高。

Phenyl Chromstar^? HP分辨率高

帶狀皰疹疫苗經(jīng)Phenyl Chromstar^? HP疏水層析介質(zhì)純化后純度可達(dá)98%。

層析柱：Chrom-LinX^? 26/200，柱高15 cm

樣品：Maxtar^? Q洗脫收集液（加入硫酸銨至電導(dǎo)為98-105 mS/cm）

Buffer A：0.6M (NH4)2SO4·PBS

Buffer B：純化水

流速：120 cm/h

圖3 Phenyl Chromstar? HP純化帶狀皰疹疫苗層析圖譜

圖片6.png

圖4 Phenyl Chromstar? HP純化后

帶狀皰疹疫苗HPLC-SEC圖

陽離子精純——MaXtar^? SP HR

精純階段選擇陽離子交換層析介質(zhì)，經(jīng)合適的純化條件，采用流穿模式，使內(nèi)毒素、HCD、HCP等痕量雜質(zhì)結(jié)合，目的蛋白流穿。百林科的MaXtar? SP HR在有效去除HCP和HCD雜質(zhì)的情況下，具有優(yōu)異的放大生產(chǎn)性能，其基架具有更強(qiáng)剛性，因此在較低的反壓下能夠?qū)崿F(xiàn)更高工藝流速，提高工藝效率；配基偶聯(lián)方式的升級(jí)，可以有效提高層析介質(zhì)的動(dòng)態(tài)結(jié)合載量；具有更細(xì)的顆粒粒徑，有效提高層析介質(zhì)的分辨率。

MaXtar^?SP HR能有效去除HCP和HCD雜質(zhì)

經(jīng)MaXtar^? SP HR純化后，HCP和HCD均符合質(zhì)量要求。

層析柱：Chrom-LinX? 26/200，柱高10 cm

樣品：超濾后收集液

Buffer A：20mM PB，pH5.8

Buffer B：20mM PB，1M NaCl，pH5.8

流速：60 cm/h

改改圖33.png 圖3 MaXtar? SP HR純化帶狀皰疹疫苗層析圖譜