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純化小技巧 | 抗體研究生產(chǎn)中的“好物分享”——層析介質(zhì)篇

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隨著抗體藥的發(fā)展，抗體的靶點(diǎn)由單一靶向轉(zhuǎn)向兩個或者多個靶向，相對應(yīng)的研究和生產(chǎn)工藝流程遇到的挑戰(zhàn)也在升級，百林科多款重磅產(chǎn)品，在抗體應(yīng)用領(lǐng)域表現(xiàn)亮眼。

抗體生產(chǎn)工藝流程圖

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表達(dá)量測定——ChromaX? A20

細(xì)胞收獲之后，需要對細(xì)胞液進(jìn)行精準(zhǔn)定量。百林科ChromaX? A20是一款能夠快速、準(zhǔn)確測定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的抗體濃度（或滴度）而設(shè)計的Protein A親和色譜分析柱，是以多孔結(jié)構(gòu)的聚苯乙烯 - 二乙烯基苯（PS-DVB）微球?yàn)樘畛漭d體，重組 Protein A 為配基，通過特有的表面處理技術(shù)和偶聯(lián)技術(shù)研制而成的。

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ChromaX? A20 親和色譜柱特點(diǎn)：

? 親水 PS-DVB 基材，具有剛性好，反壓低，傳質(zhì)快的特性。

? 獨(dú)有的親水處理技術(shù)，使非特異性吸附降至最低，確?？贵w濃度測試結(jié)果的準(zhǔn)確性。

? Protein A 特異性結(jié)合 IgG 的 Fc 區(qū)域，高選擇性保證濃度測定結(jié)果的準(zhǔn)確。

? 不銹鋼柱體，可在 HPLC 上直接使用。

? 快速高效，2~5 min 內(nèi)即可完成一次分析。

? 在抗體濃度 0.02~10 mg/mL 的寬范圍內(nèi)具有良好的線性。

? 采用耐堿 Protein A 配基，可以用 0.1 M NaOH 溶液對色譜柱進(jìn)行再生。

ChromaX?A20良好的線性關(guān)系：

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在單抗培養(yǎng)上清液較寬濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，高達(dá)0.9999

抗體分離純化

抗體純化主流工藝步驟主要包括Protein A 的捕獲和兩步精細(xì)純化步驟，百林科提供相應(yīng)解決方案如下：

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（一）抗體捕獲—MaXtar? ARPA

蛋白A親和填料MaXtar? ARPA被廣泛用于抗體純化的捕獲步驟。由于蛋白A通過Fc區(qū)特異性結(jié)合抗體，這一步可以顯著減少過程相關(guān)雜質(zhì)，包括宿主細(xì)胞蛋白和核酸。其自上市以來，在單抗、雙抗和Fc融合蛋白均有較好應(yīng)用，具有核心競爭力：

? 高耐堿的蛋白A配基，具有完全的自主知識產(chǎn)權(quán)。

? 高度交聯(lián)的瓊脂糖基架，且粒徑均一。

? 穩(wěn)定的批間一致性。

? 完善的法規(guī)支持文件RSF。

? 產(chǎn)能大，貨期短，供應(yīng)鏈穩(wěn)定，性價比高。

MaXtar? ARPA 擁有

高載量、高流速、耐堿的特性：

以Fc融合蛋白為例，在0.5M NaOH累計浸泡0h、12h、24h、48h后測試DBC10%動態(tài)結(jié)合載量。圖1數(shù)據(jù)可見：0.5M NaOH浸泡48h后，MaXtar? ARPA的動態(tài)載量保持80%以上的初始載量水平。

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圖1：各階段DBC數(shù)據(jù)

MaXtar? ARPA穩(wěn)定的批間一致性

對比測試三個不同批次的填料A（進(jìn)口品牌）和MaXtar? ARPA，圖2和圖3數(shù)據(jù)可見：3批次MaXtar? ARPA動態(tài)結(jié)合載量RSD僅2%，批間差異小于填料A；且MaXtar? ARPA回收率 RSD小于1%，批次間一致性較好。

圖表2.png

圖2：填料批次間DBC差異

圖表3.png

圖3：填料批次間回收率差異

（二）抗體精純—MaXtar? MMA

MaXtar? MMA是一款多模式填料，常用于抗體純化中的精純階段，可以去除聚集體、蛋白A配基、HCP、DNA 和病毒等多種雜質(zhì)，且具有明顯的性能優(yōu)勢：

? 改良的 MaXtar? 基架具有更強(qiáng)剛性，因此在較低的反壓下能夠?qū)崿F(xiàn)更高工藝流速，提高工藝效率。

? 高動態(tài)載量，一步結(jié)合大部分雜質(zhì)，節(jié)約時間和成本。

? 耐受廣泛的 pH 和電導(dǎo)率范圍，有助于摸索最優(yōu)工藝條件。

? 多用于挑戰(zhàn)性樣品的純化，尤其對聚集體去除表現(xiàn)突出。

MaXtar? MMA流穿模式去除聚集體

使用雙抗親和收獲樣品，對MaXtar? MMA的除聚體能力進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)純度由91.8%提升至99.5%，雙抗的聚集體含量由 6.0% 下降到至 0.5%，聚集體去除效果明顯。

圖5：MaXtar? MMA層析前后SEC-HPLC檢測圖譜

（左圖為純化層析前純度占比91.8%，聚集體占比6.0%；

右圖為層析后純度占比99.6%，聚集體占比0.5%）

（三）抗體精純—MaXtar? S HC

陽離子交換層析介質(zhì)通常用在純化中的精純步驟，以去除HCP等痕量雜質(zhì)。隨著研發(fā)人員對產(chǎn)品純化的高要求，使用者對填料提出了高載量和回收率，兼具高選擇性價比的要求。在這種背景下，百林科通過不斷努力創(chuàng)新，研發(fā)出具有高載量高分辨率的陽離子交換層析介質(zhì)-- MaXtar? S HC。

MaXtar? S HC 擁有高載量特性：

采用CHO細(xì)胞表達(dá)的單克隆抗體（精純后蛋白）作為樣品，對MaXtar? S HC的DBC（動態(tài)結(jié)合載量）進(jìn)行探索，發(fā)現(xiàn)：MaXtar? S HC的DBC是常規(guī)陽離子的2倍。