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純化小技巧| Puredex® 系列在診斷中的應(yīng)用

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Puredex^? G系列填料，想必大家都不陌生，作為交聯(lián)葡聚糖基架的凝膠過濾層析介質(zhì)，通常用于多種生物分子的脫鹽、緩沖液置換，以及小分子物質(zhì)的分離純化，比如：多肽等。

Puredex^? G系列填料根據(jù)分離范圍的不同，通常分為Puredex^? G-10，Puredex^? G-25，Puredex? G-50系列；按照顆粒粒徑從大到小排列，分別冠以C（Coarse，粗粒徑）、M（Medium，中等粒徑）、F（Fine，細粒徑）、SF（Superfine，超細粒徑）的后綴。

隨著檢驗技術(shù)的發(fā)展，選擇合適粒徑的Puredex^? G-25或Puredex^? G-50系列，利用其分子篩原理，通過添加可以與紅細胞抗原結(jié)合的抗體，即增加親和原理的方式，制作成凝膠微柱管，經(jīng)過低速離心后，凝集后的紅細胞會懸浮在填料的上層，而未能與抗體結(jié)合紅細胞就會通過填料到達管底，利用此原理可以實現(xiàn)血型的鑒定。

通常情況下，根據(jù)不同的血型鑒定需要，會制備成中性凝膠柱、特異性凝膠柱等。其中，在中性凝膠檢測中，填料不含抗體，常用于檢測IgM抗體及紅細胞抗原的反應(yīng)，通常進行ABO血型正、反定型等；而在特異性凝膠中，會填料含有特異性血型的抗體，常用于檢測血型抗原。

百林科Puredex^? G-25系列由四款不同粒徑的層析介質(zhì)組成，按照顆粒粒徑從大到小排列，分別是Puredex^? G-25C、Puredex^? G-25M、Puredex^? G-25F、Puredex^? G-25SF。Puredex^? G-50系列則由三款不同粒徑的層析介質(zhì)組成，按照顆粒粒徑從大到小排列，分別是Puredex? G-50M、Puredex^? G-50F、Puredex^? G-50SF。

其中，粒徑大小在F（細粒徑）及更大粒徑的Puredex^? G-25和Puredex^? G-50，常作為緩沖液及小分子物質(zhì)的分離；粒徑最小的Puredex^? G-25SF和Puredex^? G-50SF，常作為微柱凝膠血型卡的材料，用于血型鑒別。

技術(shù)參數(shù)

* 干粉狀態(tài)下測量，分布在范圍內(nèi)的百分比≥ 80%。

** 層析介質(zhì)在40℃，pH2-13 環(huán)境下放置7 天后，其理化性質(zhì)和功能沒有明顯變化。

使用小技巧

Puredex^? G系列填料通常以干粉的方式供貨，因此使用前需要對其進行溶脹，然后再裝填到層析柱內(nèi)使用。
根據(jù)預計裝填層析柱的柱體積計算所需要的Puredex^? G干粉的量（Puredex^? G-25溶脹約4-6 ml/g，Puredex^? G-50溶脹約9-10 ml/g）。
將Puredex^? G-25干粉填料按照4-6 ml純化水/g的比例加入純化水（或其他緩沖液），室溫下溶脹1-3個小時，或≥90℃的純化水1個小時。
將Puredex^? G-50干粉填料按照6-8 ml純化水/g的比例加入純化水（或其他緩沖液），室溫下溶脹3-8個小時，或≥90℃的純化水3個小時。
溶脹過程中可以適當攪拌以加快填料與緩沖液的接觸面積，但注意不要使用磁力攪拌子攪拌，磁力攪拌子會導致填料顆粒破裂。
填料溶脹后建議在負壓下脫氣，以減少裝填過程中氣泡的產(chǎn)生。
填料溶脹完成后，去掉部分上層清液及可能的懸浮填料，制備裝柱膠懸液比例為50%-60%，攪勻備用。