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純化小技巧 | MaXtar® COLL 400/700病毒應(yīng)用分享


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百林科多模式層析填料家族中,有這么一類(lèi)特殊的填料,憑借其獨(dú)特的填料結(jié)構(gòu),發(fā)揮凝膠過(guò)濾吸附層析的雙重特性,專(zhuān)為超大分子設(shè)計(jì)。


包括MaXtar? COLL 400MaXtar? COLL 700兩種,分別適用于分子量超過(guò)400 KD和700 KD的超大分子


MaXtar? COLL 400/700產(chǎn)品簡(jiǎn)介

獨(dú)特的雙層結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì),外殼是多孔的鈍化層 ,確保 400 KD或700 KD 以上的大分子不會(huì)進(jìn)孔,直接走外水流穿;核心是偶聯(lián)了同時(shí)具有疏水和吸附負(fù)電荷作用基團(tuán)的球形內(nèi)核,最大程度結(jié)合宿主蛋白、 核酸等雜質(zhì)。具有明顯優(yōu)勢(shì):

? 以流穿模式處理400 KD 或700 KD 以上的大分子,工藝優(yōu)化更容易,更方便線(xiàn)性放大。

? 改良的MaXtar? 基架具有更強(qiáng)剛性,因此在較低的反壓下能夠?qū)崿F(xiàn)更高工藝流速,提高工藝效率。

? 相比于傳統(tǒng)的凝膠過(guò)濾層析,擁有更大的上樣量,更高流速,生產(chǎn)效率大大提升。

? 耐受范圍廣,化學(xué)穩(wěn)定性好。

? 適用于病毒及類(lèi)病毒顆粒等生物大分子分離。


如何選擇MaXtar? COLL 400/700

? MaXtar? COLL 400:如有病毒/大分子在MaXtar? COLL 700上收率不佳,有明顯吸附現(xiàn)象,可嘗試選擇更小孔徑的MaXtar? COLL 400進(jìn)行優(yōu)化。

? MaXtar? COLL 700:主要適用分子量大于700KD(約30nm)的病毒/大分子。


MaXtar? COLL 400/700應(yīng)用案例分享


案例一:MaXtar? COLL 400在VLP的應(yīng)用 


圖片1.png

圖1:MaXtar? COLL 400純化VLP圖譜

樣品:VLP(單體60kDa,120聚體)

柱體積:30ml

上樣量:300ml

流速:7ml/min


表1新新.png

表1:MaXtar? COLL 400純化結(jié)果


小結(jié):結(jié)合層析圖譜和膠圖可見(jiàn),純度有明顯提高,雜質(zhì)去除明顯。


案例二:MaXtar? COLL 700在慢病毒中的應(yīng)用  


建議測(cè)試的工藝條件

樣品信息:濃縮后樣品

平衡Buffer: 20 mM PB,150 mM NaCl ,pH 7.5或1×DPBS,pH 7.5

CIP Buffer: 1 M NaOH,30%異丙醇  


圖片2.png

圖2:MaXtar? COLL 700純化慢病毒圖譜

表2新新.png

表2:MaXtar? COLL 700純化結(jié)果


小結(jié):回收率和雜質(zhì)去除水平,均符合預(yù)期。 


MaXtarCOLL 400/700應(yīng)用過(guò)程中的Tips


◆ 為最大程度發(fā)揮COLL系列內(nèi)部的多種配基吸雜效果,建議在緩沖液中添加100~150mM NaCl;

◆ 由于雜質(zhì)與內(nèi)部配基之間的高效多模式結(jié)合,需要對(duì)填料進(jìn)行有效清潔,建議使用1M NaOH, 30%異丙醇。

◆ 不推薦使用檸檬酸鹽緩沖液,因?yàn)闄幟仕犭x子會(huì)與配基相互作用。


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